El principio químico de la hibridación molecular es formar
La hibridación molecular es una técnica para determinar la secuencia de bases de un ácido nucleico monocatenario.
El principio básico es que el ácido nucleico monocatenario a analizar y el ácido nucleico monocatenario de secuencia conocida (llamado sonda) forman un fragmento de doble hélice detectable mediante emparejamiento de bases.
Esta tecnología se puede realizar entre ADN y ADN, ARN y ARN, o ADN y ARN, formando diferentes tipos de moléculas híbridas como ADN-ADN, ARN-ARN o ARN-ADN.
Principios básicos de la hibridación molecular
(1) Desnaturalización del ADN
La desnaturalización del ADN se refiere a la rotura de los enlaces de hidrógeno entre dobles hélices y el desenrollamiento de la doble hélice. para formar una sola hebra bobinas irregulares, lo que resulta en cambios de propiedades (como disminución de la viscosidad, aumento de la velocidad de sedimentación, aumento de la flotabilidad, aumento de la absorción de rayos UV, etc.).
(2) Renaturalización
Mientras se eliminen las condiciones desnaturalizantes, las dos hebras complementarias de ADN desnaturalizado pueden recombinarse y restaurar la estructura de doble hélice original. Este proceso se llama renaturalización.
(3) Recocido
Por lo general, después de la desnaturalización térmica del ADN, la temperatura se enfría lentamente y se mantiene entre 25 y 30 °C por debajo de la Tm del ADN monocatenario desnaturalizado. Se restablece la estructura de doble hélice, por lo que este proceso también se denomina recocido. Después de la renaturalización, se pueden restaurar las propiedades físicas y químicas del ADN. Si el ADN se enfría rápidamente después del cambio térmico, no podrá renaturalizarse.
La importancia de la hibridación molecular del ADN
La hibridación molecular puede ocurrir entre moléculas de ADN de especies taxonómicamente diferentes, pero existe la posibilidad de hibridación entre moléculas de ADN de especies mucho más pequeñas. los de especies estrechamente relacionadas. Por ejemplo, la posibilidad de que se formen moléculas híbridas entre moléculas de ADN bacterianas y eucariotas es muy pequeña.