cck8 pasos experimentales y precauciones

pasos experimentales de cck8:

1. Placa de semilla de células: Digerir las células en fase de crecimiento logarítmico con tripsina y preparar una suspensión celular. Añadir 100 μl a cada pocillo para formar cada célula. La densidad de los pocillos es de 1000 a 5000 y los pocillos de los bordes se llenan con PBS estéril. Cultivar a 37°C en CO2 al 5% hasta que las células se adhieran a las células y cubran el fondo del pocillo.

2. Añadir medicamentos según el plan experimental. Se recomienda configurar de 4 a 6 orificios múltiples para cada tratamiento.

3. Después del tratamiento, agregue 10 μl de solución CCK-8 a cada pocillo, golpee suavemente la placa de cultivo para mezclar e incube en la incubadora durante 1 a 4 horas.

4. Utilice un lector de microplacas para medir el valor de absorción de luz de 450 nm y calcule la tasa de inhibición del fármaco en las células según la fórmula.

Notas

1. Si no desea medir el valor de DO temporalmente, puede agregar 10 μl de solución de HCl 0,1 M o solución de SDS al 1 % (p/v) a cada pocillo. y manténgalo alejado de la temperatura ambiente. El valor de absorbancia no cambiará después del almacenamiento y la medición de la luz dentro de las 24 horas.

2. Si la sustancia a probar tiene propiedades oxidantes o reductoras, retire el medio de cultivo antiguo antes de agregar CCK-8, lávelo dos veces con medio de cultivo y luego agregue medio de cultivo nuevo para eliminar la influencia.