Cultivo de células dendríticas derivadas de la médula ósea de ratón (BMDC)
DC? es la abreviatura de "Células Dendríticas", y su nombre completo en chino es "células dendríticas". Debe su nombre a las numerosas protuberancias dendríticas o parecidas a pseudópodos que se extienden cuando maduran. La DC fue descubierta en 1973 por el científico canadiense Ralph M. Steinman, ganador del Premio Nobel en 2011. Es la célula presentadora de antígenos (APC) más potente descubierta hasta el momento. Se ha confirmado que las CD son las únicas APC que pueden estimular significativamente la proliferación de células T vírgenes (células T ingenuas), mientras que otros tipos de APC (como monocitos, macrófagos, células B, etc.) sólo pueden estimular las células activadas. o células de memoria, por lo tanto DC, son las iniciadoras de la respuesta inmune adaptativa de las células T del cuerpo y desempeñan un papel extremadamente importante en la inmunidad tumoral.
Aunque las CD existen en varios tejidos del cuerpo, su contenido es muy pequeño y no puede satisfacer las necesidades de la investigación científica y el tratamiento clínico. Por lo tanto, la gente ha probado varios métodos para cultivar y expandir las CD in vitro. En humanos, el enfoque más común es inducir la generación de CD a partir de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC). Para ratones, el método más común es inducir DC a partir de células de la médula ósea, es decir, DC derivadas de la médula ósea (células dendríticas derivadas de la médula ósea, BMDC).
Este artículo presenta principalmente:
¿Método de cultivo BMDC clásico-método Inaba (mejorado)?
Método de preparación a gran escala del método BMDC-Son
Método de preparación a gran escala de BMDC: método Lutz
Notas
Método de cultivo clásico de BMDC: método Inaba (mejorado)
Antecedentes:
1. El número de BMDC obtenidos mediante el método Inaba es 5-7 x 106/ratón;
2. El método Inaba original es más complicado y requiere el uso del método anticuerpo + complemento para tratar los linfocitos en la médula ósea se eliminó previamente y los métodos mejorados posteriores omitieron este paso. De hecho, Inaba dijo más tarde que aunque este paso puede mejorar la pureza de BMDC, no afectará la generación de BMDC y se puede realizar. O no. Tanto LPS como CD40L son fuertes inductores de la maduración completa de las DC in vitro. Inducen la maduración de las DC en un grado similar, pero los perfiles de citocinas que inducen son diferentes. Las BMDC maduras inducidas por CD40L muestran las capacidades inmunomoduladoras más fuertes in vivo, incluida la generación de respuestas inmunes tumorales protectoras y terapéuticas.
La concentración utilizada para estimular la maduración completa de las DC con LPS es generalmente de 1-10 μg/ml, pero de hecho 0,1 μg/ml ya tiene un efecto muy fuerte, pero para estar seguros, 1 μg/ml Generalmente se utiliza ml.
En cuanto al CD40L, cabe destacar que la molécula CD40L pertenece a la familia de ligandos del TNF, y la característica de esta familia es que sólo puede funcionar después de formar un trímero. Por lo tanto, es mejor utilizar la proteína trímera CD40L recombinante para estimular las DC, lo que tendrá un buen efecto. Si se utiliza el monómero CD40L para estimular las DC, el nivel de madurez no es muy alto en la mayoría de los casos.
4. Selección de métodos de cultivo
Recomendación de reactivos relacionados con BMDC
Nota: La expresión de los marcadores de superficie utilizados para la identificación de DC se muestra en el diagrama de flujo A. pico único y, en la mayoría de los casos, no se puede distinguir completamente del pico negativo. Para evitar resultados inexactos causados por un ajuste de compensación deficiente durante el análisis multicolor, se recomienda utilizar una etiqueta única o como máximo una etiqueta doble para el análisis de los marcadores de superficie DC y un control de isotipo, en lugar de un control de celda en blanco. , debe usarse para excluir el teñido de fondo.
Debido a que este artículo incluye una gran cantidad de contenido técnico, si tiene alguna pregunta sobre los pasos experimentales, puede consultar la fuente original: /xwzx_936.html.
Nota: Este artículo es sólo de referencia