¿Cómo configurar el medio de cultivo?
1. Conocimientos básicos de la configuración del medio
El medio es una mezcla de nutrientes necesarios para el crecimiento de células o microorganismos. Se debe prestar atención a los siguientes aspectos a la hora de configurar el medio de cultivo:
1. Componentes: Los componentes del medio de cultivo deben cumplir con los nutrientes requeridos por las células o microorganismos. Suele incluir componentes como fuentes de carbono, fuentes de nitrógeno, minerales, vitaminas, factores de crecimiento y amortiguadores.
2. Valor de pH: El valor de pH del medio de cultivo debe controlarse dentro de un rango adecuado para mantener el crecimiento y metabolismo de las células o microorganismos. Diferentes células o microorganismos tienen diferentes requisitos en cuanto al valor del pH y, por lo general, es necesario ajustar el valor del pH de diferentes medios de cultivo.
3. Temperatura: La preparación y almacenamiento del medio de cultivo deben realizarse a una temperatura adecuada para mantener la estabilidad y actividad del medio de cultivo.
4. Estabilidad: El medio de cultivo debe ser estable y poder almacenarse durante mucho tiempo sin perder eficacia. Para mantener la estabilidad del medio de cultivo, se puede dividir en alícuotas y almacenar en un ambiente seco y a baja temperatura.
2. Fórmula del medio
La siguiente es la fórmula del medio LB de uso común:
1. Extracto de levadura: 5 g/L
2. Triptona: 10 g/L
3. Cloruro de sodio: 10 g/L
Tres de los anteriores. Las proporciones y concentraciones de los distintos ingredientes se pueden ajustar. según sea necesario para satisfacer las necesidades de crecimiento de diferentes cepas.
Además de los tres ingredientes principales anteriores, al medio de cultivo LB también se pueden añadir otros ingredientes, como glucosa, agar, tampón fosfato, etc., para satisfacer las necesidades de crecimiento de diferentes cepas. Por ejemplo, la glucosa puede proporcionar una fuente de carbono para promover el crecimiento y la reproducción bacteriana; el agar puede solidificar medios de cultivo líquidos en un medio de cultivo sólido para facilitar el recuento y la separación de colonias; el tampón fosfato puede ajustar el valor del pH y mantener la estabilidad del medio de cultivo.
3. Pasos de preparación del medio
1. Preparar reactivos e instrumentos: Prepare los reactivos e instrumentos necesarios para el medio de cultivo y asegúrese de que estén secos y estériles.
2. Pesar los reactivos: Según los requisitos de la fórmula, pesar los reactivos requeridos en secuencia y agregarlos al agua destilada.
3. Mezclar uniformemente: Utilice un agitador magnético para mezclar el medio uniformemente hasta que el reactivo se disuelva por completo.
4. Ajuste el valor del pH: utilice un medidor de pH para medir el valor del pH del medio de cultivo. Si es necesario, agregue una cantidad adecuada de solución ácido-base para ajustar el valor del pH.
5. Esterilización: Vierta el medio de cultivo en una botella de cultivo adecuada y utilice un esterilizador de vapor de alta presión para esterilizar el medio de cultivo.
6. Almacenamiento: Almacenar el medio de cultivo esterilizado en un ambiente seco y de baja temperatura para evitar la humedad y la contaminación.
IV.Precauciones en el uso del medio de cultivo
1. El valor del pH del medio de cultivo debe controlarse dentro de un rango adecuado para mantener el crecimiento y metabolismo de las células o microorganismos.
2. Antes de utilizar el medio de cultivo, se debe esterilizar para evitar la contaminación del medio de cultivo por bacterias u hongos.
3. La preparación y el uso de medios de cultivo deben seguir estrictamente los procedimientos operativos para evitar un mal funcionamiento y la contaminación cruzada.
4. El almacenamiento y conservación de los medios de cultivo debe realizarse en un ambiente seco y de baja temperatura para evitar la humedad y la contaminación.
5. Resumen
El medio es una mezcla de nutrientes necesarios para el crecimiento de células o microorganismos. Se debe prestar atención a su composición, valor de pH, temperatura y estabilidad. La fórmula comúnmente utilizada del medio LB incluye extracto de levadura, triptona y cloruro de sodio. Los pasos de preparación incluyen pesar los reactivos, mezclar uniformemente, ajustar el valor del pH, esterilización y almacenamiento. Cuando se utilizan medios de cultivo, se deben observar los procedimientos operativos para evitar un mal manejo y la contaminación cruzada.