¿Cuáles son los métodos de preparación de anticuerpos?

(1) Preparación de anticuerpos policlonales.

① Métodos de inmunización: para los anticuerpos policlonales, los métodos de inmunización generalmente incluyen inmunización subcutánea o intramuscular, inmunización intradérmica, inmunización de ganglios linfáticos y métodos mixtos. En general, el método de inmunización subcutánea o intramuscular produce más anticuerpos; el método de inmunización intradérmica requiere una pequeña cantidad de antígeno, lo que es especialmente adecuado cuando el antígeno es valioso, pero por el contrario, la cantidad de anticuerpos que produce no es grande. La ventaja del método de inmunización mixta es que la cantidad de antígeno es pequeña y el anticuerpo se produce rápidamente.

②Preparación de anticuerpos policlonales: inmunizar animales con antígenos (los animales más utilizados son conejos, ovejas, perros, etc.), aislar antisuero y purificar anticuerpos. Los anticuerpos policlonales tienen poca uniformidad y especificidad relativamente baja. Por lo tanto, la aplicación de anticuerpos policlonales en la tecnología de detección rápida de residuos de pesticidas está sujeta a ciertas limitaciones. Sin embargo, en los últimos años, algunos estudiosos han aprovechado la alta reactividad cruzada de los polianticuerpos preparando haptenos con la "estructura antigénica" de un determinado tipo (o varios) de pesticidas o preparando haptenos que contienen múltiples determinantes antigénicos artificiales. Los antígenos se utilizan para preparar anticuerpos "específicos de amplio espectro" para el análisis de residuos múltiples de pesticidas.

(2) Preparación de anticuerpos monoclonales. La tecnología de preparación de anticuerpos monoclonales fue creada originalmente por Keller y Milstein (1975) utilizando tecnología de hibridoma de linfocitos B. En la actualidad, esta tecnología se ha utilizado ampliamente en el diagnóstico de enfermedades, investigaciones biológicas y médicas, pruebas (monitoreo) ambientales y de seguridad alimentaria, etc. Los anticuerpos monoclonales tienen una alta homogeneidad y solo se unen a un determinado determinante del antígeno, lo que da como resultado una mayor especificidad. Además, las células monoclonales que producen anticuerpos pueden pasarse y multiplicarse in vitro, y la producción de anticuerpos no está limitada por el tiempo de inmunización del animal. . Siempre que las técnicas de manejo y cultivo sean correctas, se pueden producir anticuerpos en cantidades ilimitadas. Los procesos básicos son la inmunización animal, la fusión celular, la detección de clones, la identificación de propiedades de anticuerpos monoclonales, la inducción, recolección y purificación de ascitis, etc.

(3) Preparación de anticuerpos recombinantes. En los últimos años, con el desarrollo de la tecnología de proteínas y la tecnología de ADN recombinante, las personas han obtenido anticuerpos que pueden especificar posiciones espaciales y tienen diversas especificidades a través de la investigación sobre la naturaleza genética de la producción de anticuerpos, la tecnología de detección de anticuerpos genéticos recombinantes y la manipulación genética inducida por el posicionamiento directo. tecnología, afinidad y anticuerpos recombinantes artificiales que pueden tolerar ciertas temperaturas, pH y solventes orgánicos. Generalmente, los ratones se inmunizan con el antígeno y, después de un cierto período de tiempo, se extrae el bazo del ratón en condiciones estériles, se extrae el ARN total de las células del bazo y el ADNc sintetizado mediante transcripción inversa del ARN se utiliza como plantilla para amplificar el anticuerpo mediante PCR, y la cadena ligera y la cadena pesada en el anticuerpo se conectan en ScFv (fragmento variable de cadena única). El fragmento ScFv amplificado por PCR se digiere, se liga con un fago vector y luego se transforma en E. coli u otros organismos mediante métodos convencionales. Los anticuerpos recombinantes se obtienen cultivando artificialmente E. coli con anticuerpos de fagos. Este método produce anticuerpos rápidamente y puede cambiar las características del anticuerpo mediante mutagénesis para hacerlo más específico. Además, la biblioteca de anticuerpos en fagos obtenida con esta tecnología puede identificar múltiples pesticidas al mismo tiempo y puede usarse para pruebas inmunes rápidas. Plaguicidas multiresiduos. Investigación sobre tecnología.