Me gustaría conocer el medio de cultivo y el proceso de producción necesarios para el cultivo líquido de E. coli. Cuanto más detallados, mejor.

Medio GYT (Tung y Chow 1995)

10 (v/v) glicerol

0,125 (m/v) extracto de levadura

Triptona 0,25 (m/v)

Utilice un filtro de 0,22 um para filtrar y esterilizar, dividir en porciones de 2,5 ml y almacenar a 4 °C.

Medio LB (Luria-Bertani)

Para preparar cada litro de medio, añadir: 10g de triptona a 950ml de agua desionizada

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Extracto de levadura 5g

NaCl 10 g

Agitar el recipiente hasta que se disuelva el soluto. Ajuste el valor del pH a 7,0 con 5 mol/l de NaOH (aproximadamente 0,2 ml). Diluir a 1L con agua desionizada. Esterilice con vapor a 15 psi (1,05 kg/cm2) de alta presión durante 20 minutos.

Medio de cultivo M9

Para preparar 1 litro de medio de cultivo, agregue: 750 m1 de agua desionizada estéril (enfriada a 50 ℃ o menos):

5 × solución salina M9 200ml

1 mol/LMgSO4 2 ml

Solución 20 de fuente de carbono adecuada (como 20 glucosa) 20ml

1 mol/LCaCl2 0,1 ml

Agua desionizada esterilizada hasta 980ml.

Si es necesario, se pueden añadir soluciones de almacenamiento de aminoácidos y vitaminas adecuadas al medio de cultivo M9.

Preparación de solución salina 5×M9: Disolver las siguientes sales en agua desionizada, el volumen final es 1L:

Na2HPO4·7H2O 64g

KHPO4 15g

NaCl 2,5 g

NH4Cl 5,0 g

Dividir en porciones de 200 ml y esterilizar con vapor a alta presión de 15 psi (1,05 kg/cm2) durante 15 min.

Preparar solución de MgSO4 y solución de CaCl2 respectivamente y esterilizarlas mediante alta presión. Después de diluir la solución salina 5xM9 a 980 ml con agua esterilizada, agregue las soluciones de MgSO4 y CaCl2. La solución de glucosa se filtró y se esterilizó a través de un filtro de 0,22 µm antes de agregarla a la solución de sal M9 diluida. Cuando utilice E. coli que contenga un defecto del operón de biosíntesis de prolina cromosómica [Δ(lac-proAB)] y el gen proAB complementario en el plásmido F', agregue los siguientes ingredientes al medio mínimo M9:

0,4 ​​(m /v) glucosa (dextrosa)

MgSO4·7H2O 5mM

0,01 tiamina

Medio NZCYM

Para preparar cada litro de medio de cultivo , añadir:

Amina NZ 10g

NaCl 5g

Extracto de levadura 5g

Hidrolizado de caseína 1g

MgSO4 ·7H2O 2g

Agitar el recipiente hasta que el soluto se disuelva por completo. Ajuste el valor del pH a 7,0 con 5 mol/l de NaOH (aproximadamente 0,2 ml). Diluir a 1L con agua desionizada.

Esterilice con vapor a 15 psi (1,05 kg/cm2) de alta presión durante 20 minutos.

Amina NZ: hidrolizado de caseína (ICN Biochemicals).

También se pueden utilizar NZCYM, NZYM y NZM con medio deshidratado de BD Biscienses.

Medio NZYM

El medio NZYM contiene los mismos ingredientes que el medio NZCYM excepto que no contiene hidrolizado de caseína.

Medio NZM

El medio NZM contiene los mismos ingredientes que el medio NZYM excepto que no contiene extracto de levadura.

Medio SOB

Preparar cada litro de medio y añadir:

20g de triptona a 950ml de agua desionizada

Extracción de levadura 5g de sustancia

NaCl 0,5 g

Agitar el recipiente para disolver completamente el soluto. Agregue 10 ml de solución de KCl de 250 mmol/l (disolver 1,86 g de KCl en 100 ml de agua desionizada para preparar una solución de KCl de 250 mmol/l). Utilice 5 mol/L de NaOHlt;!gt; para ajustar el valor del pH a 7,0. Diluir a 1L con agua desionizada. Esterilice con vapor a 15 psi (1,05 kg/cm2) de alta presión durante 20 minutos. Antes de usar, agregue 5 ml de MgCl2 esterilizado de 2 mol/l a la solución. El método de preparación de la solución de MgCl2 de 2 mol/L es el siguiente: disuelva 19 g de MgCl2 en 90 ml de agua desionizada, ajuste el volumen a 100 ml con agua desionizada. agua y ajustar la temperatura a 15 psi (1,05 kg /cm2) Esterilización con vapor a alta presión durante 20 minutos].

Medio SOC

Excepto por contener 20 mmol/L de glucosa, los demás componentes del medio SOC son los mismos que los del medio SOB. Después de esterilizar el medio SOB mediante alta presión y enfriarlo a 60 °C o menos, agregue 20 ml de solución de glucosa esterilizada de 1 mol/l (el método de preparación de la solución de glucosa de 1 mol/l es: disolver 18 g de glucosa en 90 ml de agua desionizada , y después de que esté completamente disuelto, diluir a 100 ml con agua desionizada, filtrar y esterilizar con filtro de 0,22 um).

Caldo estupendo (también conocido como medio TB, Tartof y Hobbs 1987)

Para preparar cada litro de medio de cultivo, añadir:

Caldo pancreático a 900 ml de agua desionizada Peptona 12g

Extracto de levadura 24g

Glicerol 4ml

Agitar el recipiente para disolver completamente el soluto. Luego, esterilice con vapor a 15 psi (1,05 kg/cm2) de alta presión durante 20 minutos. Cuando la solución se enfríe a 60 °C o menos, agregue 100 ml de solución estéril de KH2PO4 de 0,17 mol/l, K2HPO4 de 0,72 mol/l [El método de preparación de esta solución es: use 90 ml de agua desionizada para disolver 2,31 g de KH2PO4 y 12,54 g K2HPO4. Después de la disolución completa, ajuste el volumen a 100 ml con agua desionizada y esterilícelo con vapor a una alta presión de 15 psi (1,05 kg/cm2) durante 20 minutos.

2×Medio YT

Para preparar cada litro de medio, añadir:

16g de triptona en 900ml de agua desionizada

Extracto de levadura 10g

NaCl 5g

Agitar el recipiente hasta disolver el soluto, ajustar el pH a 7,0 con NaOH 5N y llevar el volumen a 1L con agua desionizada. Esterilice con vapor a 15 psi (1,05 kg/cm2) de alta presión durante 20 minutos.