¿Qué kit se utiliza generalmente para extraer ADN libre de células en suero?
Kit de extracción de ADN a base de sangre
Pasos de operación:
, volumen de sangre completa, pasos de operación: lt; 400ul de sangre completa, 300ul de volumen de procesamiento de sangre
p>
1. Agregar 2,5 veces el volumen de Solución A a 300ul de sangre anticoagulante. Mezclar por inversión y centrifugar a 12000 rpm durante 1 minuto. Desechar el líquido.
2. 1 nuevamente y deseche el líquido
3. Prepare la mezcla de Solución B y Solución C de acuerdo con la tabla adjunta en la página 3 (consulte la tabla adjunta para conocer la dosis de la Solución B y la Solución C)
4. Agregue 150 ul de la solución mezclada y pipetee uniformemente durante 60 °C. Incubar en un baño de agua o incubadora durante 10 minutos. Durante el período de incubación, invierta y mezcle la solución de rojo a amarillo verdoso o marrón.
5. Agregue un volumen igual de alcohol isopropílico y mezcle bien hasta que se vuelva filamentoso o floculante. Centrifugue durante 1 minuto y deseche el líquido transparente.
6. Centrifugar durante 1 minuto a 12000 prm y usar una pipeta para eliminar el líquido transparente y secar a temperatura ambiente durante 10 ~ 15 minutos.
7. o durante la noche, disuelva el ADN y pipetee uniformemente. Guarde el conjunto de ADN base a -20 °C
2. Procedimiento para medir sangre completa: 1 ~ 10 ml de volumen de sangre Ejemplo de volumen de procesamiento de sangre de 3 ml
1. Agregar 2,5 veces el volumen de Solución A a 3 ml de sangre anticoagulante. Mezclar por inversión y centrifugar a 3000 rpm durante 5 minutos. Desechar el líquido.
2. /p >
3. Prepare la mezcla de Solución B y Solución C de acuerdo con la tabla adjunta en la página 3 (consulte la tabla adjunta para conocer la dosis de la Solución B y la Solución C)
4. ml de la solución mezclada con pipeta de 1 ml. Incubar en un baño de agua a 60 °C o en una incubadora durante 10 minutos con una pipeta o pipeta de plástico. Durante el período de incubación, invertir y mezclar la solución de rojo a amarillo verdoso o marrón.
5. Agregue un volumen igual de alcohol isopropílico, mezcle bien y mezcle bien el ADN básico filamentoso o floculante.
6. Utilice una pipeta para transferir el flóculo a un tubo EP de 1,5 ml con 800 ul de 75. alcohol invierta a 12000 prm y centrifugue durante 3 minutos. Deseche y seque a temperatura ambiente durante 10 a 15 minutos.
p>7. Disuelva el ADN durante la noche y pipeteelo uniformemente. Guarde el ADN básico a -20 °C.
3. Mida los pasos de sangre total: 10 ~ 20 ml de volumen de sangre, ejemplo de volumen de procesamiento de sangre de 10 ml.
1. Añadir 2,5 veces el volumen de Solución A a 10 ml de sangre anticoagulante, invertir y mezclar, centrifugar a 8000 rpm durante 5 minutos y desechar la solución;
2. Repetir el paso 1 y desechar el líquido. p>
3. Prepare una mezcla de Solución B y Solución C de acuerdo con la tabla adjunta en la página 3 (consulte la tabla adjunta para conocer las cantidades de uso de la Solución B y la Solución C);
4. Agregue 5 ml de la solución mezclada y pipetee uniformemente con una pipeta de plástico. Incube en un baño de agua a 60 °C o en una incubadora durante 10 minutos. Durante el período de incubación, invierta y mezcle hasta que la solución cambie de rojo a amarillo verdoso o marrón. /p>
5. Agregue un volumen igual de alcohol isopropílico. Llene, invierta y mezcle hasta que haya ADN de base filamentoso o floculante;
6. tubo de 800ul 75 de alcohol. Invierta el tubo a 12000prm e incube durante 1 minuto. Deseche y aclare a temperatura ambiente. Seque durante 10 a 15 minutos;
7. durante 10 a 15 minutos o durante la noche para disolver el ADN. Utilice una pipeta o una pipeta de plástico para distribuir uniformemente y almacenar el conjunto de bases de ADN a -20 °C
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