Colección de citas famosas - Colección de consignas - Escribir los principios y procesos básicos de la secuenciación del ADN de Sanger.

Escribir los principios y procesos básicos de la secuenciación del ADN de Sanger.

Respuesta: El principio básico de la tecnología de secuenciación de ADN de Sanger es agregar un 2',3'-didesoxinucleósido trifosfato (ddNTP) a la reacción. Esta sustancia no tiene 3'-OH, por lo que el desoxinucleótido. La cadena no se puede extender. El procedimiento completo del ensayo es el siguiente:

(1) Convierta el ADN que se va a analizar en una plantilla monocatenaria. Añadir a 4 tubos de reacción respectivamente. Y agregue cebadores, ADN polimerasa y 4 dNTP (uno de los cuales está marcado con 32P) a cada tubo.

(2) Agregue ddTTP, ddCTP, ddGTP y ddATP a cuatro tubos respectivamente y manténgalos calientes.

(3) Después de la reacción, se formaron en cuatro tubos A una serie de cebadores con los mismos extremos 5'-cebador y que terminaban con residuos ddT, ddC, ddG y ddA como extremos 3'. mezcla de largo y corto.

(4) Cada mezcla se separó mediante electroforesis de poliacrilamida desnaturalizante y autorradiografía. Se puede observar que las cuatro mezclas formaron diferentes bandas de migración electroforética. Cada banda representa un segmento terminado con ddNTP. Simplemente siga el orden en que aparecen las bandas de electroforesis para leer la secuencia del ADN que se está analizando.

El método Sanger puede sintetizar una secuencia de unos 300 nucleótidos a partir del extremo 3' del cebador. Es uno de los métodos más importantes de la biología molecular actual.

上篇: ¿Cuáles son las malas combinaciones de palabras? 下篇: ¿Qué literatura hay sobre la princesa Jincheng? Envió personalmente a la princesa Jincheng al condado de Shiping y luego la envió a Tubo para formar una alianza con el general Yang Hui. Después de que la princesa Jincheng dio a luz al príncipe Song Dezan, la concubina Nalang, sin hijos, se puso celosa. Le quitó el bebé a la princesa cuando estaba de parto y afirmó que había dado a luz al bebé. Más de un año después, la princesa Jincheng se reunió con su hijo.