¿Cómo operar la cromatografía en columna de gel?

El método de uso de cromatografía en columna de gel generalmente tiene los siguientes pasos:

(1) Pretratamiento: Pesar varios gramos de Sephadex (diferentes modelos), agregar eluyente Agregar un agente (generalmente metanol). o agua, aquí se usa metanol como ejemplo) aproximadamente 20 veces la cantidad de gel, y se deja a temperatura ambiente durante 3 horas para que se hinche. El hinchamiento debe ser completo, de lo contrario el caudal después de la carga en la columna se ralentizará y. el gel se romperá.

(2) La relación entre el diámetro de la columna de cromatografía en gel empaquetada y la longitud de la columna es generalmente de 1:15.

(3) La columna cromatográfica cargada debe cargarse con al menos una cantidad equivalente de Equilibrar con 3 veces el volumen de retención del eluyente.

(4) Durante la elución y recolección, se debe usar metanol como eluyente y se debe llevar a cabo de manera continua para mantener una cierta capa líquida en el extremo superior de la columna de gel para evitar que haya líquido en la superficie de la columna de gel.