Fórmula de cálculo del contenido de proteínas mediante el método Kjeldahl

La fórmula para calcular el contenido de proteínas mediante el método de determinación de nitrógeno de Kjeldahl es contenido de proteínas (mg) = contenido de nitrógeno (V1) × concentración de la solución de calibración (C2) × 5,7 / volumen de muestra (V2).

El método de determinación de nitrógeno Kjeldahl fue establecido por el químico danés Kejdal en 1883. Ahora se ha convertido en los métodos de determinación de nitrógeno Kjeldahl constante, de traza e incluso de traza y en el método de determinación automática de nitrógeno. para analizar el contenido de nitrógeno de compuestos orgánicos.

La base teórica del método de determinación de nitrógeno de Kjeldahl es que el contenido de nitrógeno en las proteínas suele representar alrededor del 16% de su masa total (12% a 19%). sustancia Se puede estimar el contenido total de proteínas en la sustancia (suponiendo que todo el nitrógeno en la sustancia medida proviene de proteínas).

El método Kjeldahl es un método para determinar el nitrógeno total en un compuesto o mezcla. Es decir, en presencia de un catalizador, la muestra se digiere con ácido sulfúrico concentrado para convertir todo el nitrógeno orgánico en sales de amonio inorgánicas, y luego las sales de amonio se convierten en amoníaco en condiciones alcalinas, que se destilan con vapor de agua y se absorben. por exceso de ácido bórico líquido y luego valorando con ácido clorhídrico estándar, se puede calcular la cantidad de nitrógeno en la muestra.

Dado que el contenido de nitrógeno de las proteínas es relativamente constante, el contenido de proteínas se puede calcular a partir de su contenido de nitrógeno, por lo que este método es un método clásico de cuantificación de proteínas.

Principio de cálculo del contenido de proteínas mediante el método Kjeldahl:

La proteína es un compuesto orgánico que contiene nitrógeno. La proteína se calienta y se nitra con ácido sulfúrico concentrado y un catalizador para descomponer la proteína, y el amoníaco descompuesto se combina con ácido sulfúrico para formar sulfato de amonio. Luego, la destilación alcalina libera el amoníaco, lo absorbe con ácido bórico y luego lo valora con una solución estándar de ácido sulfúrico o ácido clorhídrico. El consumo de ácido se multiplica por un factor de conversión y se convierte en contenido de proteína.

Notas:

(1) La muestra debe ser uniforme. Las muestras sólidas se deben moler y mezclar previamente, y las muestras líquidas se deben agitar o agitar uniformemente.

(2) Cuando se coloque la muestra en la botella de nitrógeno, no se pegue al cuello. En caso de adherencia, enjuáguela con una pequeña cantidad de agua para evitar una digestión incompleta de la muestra y resultados inferiores.

(3) Si no es fácil formar una solución transparente durante la digestión, puede enfriar la botella de nitrógeno y agregar lentamente 2-3 ml de peróxido de hidrógeno (H2O2) al 30% para promover la oxidación.

(4) No utilizar fuego fuerte durante todo el proceso de digestión. Mantener un hervor suave para que el fuego se concentre en el fondo del matraz Kjeldahl para evitar que la proteína adherida a la pared pierda nitrógeno en ausencia de ácido sulfúrico.

(5) Si falta ácido sulfúrico, demasiado sulfato de potasio provocará la pérdida de amoníaco, que formará hidrogenosulfato de potasio sin interactuar con el amoníaco. Por lo tanto, cuando se consume demasiado ácido sulfúrico o el contenido de grasa en la muestra es demasiado alto, se debe aumentar la cantidad de ácido sulfúrico.

(6) La función de agregar sulfato de potasio es aumentar el punto de ebullición de la solución, el sulfato de cobre se usa como catalizador y el sulfato de cobre se usa como indicador de la reacción alcalina durante la destilación.

(7)? El indicador mixto aparece verde en solución alcalina, gris en solución neutra y rojo en solución ácida. Si no se dispone de verde de bromocresol, se puede utilizar sola una solución de etanol rojo de metilo al 0,1%.