Cómo expresar proteínas de cuerpos de inclusión en el sobrenadante

La expresión de alto nivel de proteínas en E. coli a menudo da como resultado la formación de gránulos o inclusiones citoplasmáticas visibles bajo microscopía de contraste de fases. Estos cuerpos de inclusión agregados por proteínas expresadas se separan fácilmente de las proteínas solubles y unidas a membrana. Las bacterias que expresan altos niveles de proteínas extrañas se pueden lisar mediante métodos mecánicos, sonicación o lisozima más detergentes después de concentrarlas mediante centrifugación. Después de la centrifugación, los cuerpos de inclusión se pueden lavar con Triton X-100 y EDTA o con urea. En la mayoría de los casos, ajustar las condiciones de lavado puede hacer que la pureza de la proteína extraña en los cuerpos de inclusión alcance más del 90%.