¿Cuál es el principio de la cromatografía DEAE?
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La tecnología de cromatografía utiliza celulosa de intercambio iónico o gel de dextrano de intercambio iónico como fase estacionaria y proteínas y otras muestras como fase móvil para separar y purificar proteínas, ácidos nucleicos, enzimas, hormonas, polisacáridos, etc. una tecnología.
Hay ciertos grupos iónicos combinados en las moléculas de celulosa y dextrano. Cuando se combinan con los grupos catiónicos, se pueden intercambiar aniones, lo que se denomina intercambiador aniónico. Como la celulosa dictilaminoetil (DEAE). DEAE se combina con celulosa y contiene celulosa catiónica cargada positivamente -O-C6 H14N+H. Sus contraiones son aniones (como Cl-, etc.), que pueden intercambiarse con aniones de proteínas cargados negativamente. Cuando se combinan grupos aniónicos, se pueden reemplazar cationes, lo que se denomina intercambiador de cationes, como la carboximetil (carboximetil, CM) celulosa. La molécula de celulosa tiene aniones cargados negativamente (celulosa-O-CH2-COO-), y sus contraiones son cationes (como Na+, etc.), que pueden intercambiarse con cationes proteicos cargados positivamente.
Cuando el valor del pH de la solución es igual al punto isoeléctrico de la proteína, la carga electrostática es 0. Cuando el valor del pH de la solución es mayor que el punto isoeléctrico de la proteína, el carboxilo Los grupos están libres y la proteína tiene carga negativa. Por el contrario, cuando el valor del pH de la solución es inferior al punto isoeléctrico de la proteína, los grupos amino se ionizan y la proteína queda cargada positivamente. Cuanto más lejos esté el pH de la solución del punto isoeléctrico de la proteína, más cargada eléctricamente estará la proteína. Al contrario, menos. Todas las proteínas séricas están cargadas negativamente, pero el grado de carga negativa de varias proteínas varía, siendo la albúmina la más cargada negativamente, seguida de la globulina, la globulina y la globulina.
A una concentración de sal adecuada, cuando el valor del pH de la solución es superior al punto isoeléctrico, la proteína es adsorbida por el intercambiador aniónico; cuando el valor del pH de la solución es inferior al punto isoeléctrico, la proteína es adsorbida por el intercambiador de cationes. Porque varias proteínas tienen cargas diferentes. El grado de unión entre ellos y el intercambiador también es diferente siempre que cambie el valor del pH de la solución, afectará directamente la adsorción de proteínas y intercambiadores, que pueden separar diferentes proteínas una por una.
El intercambiador tiene la capacidad de intercambiar y adsorber tanto iones coloidales (como las proteínas) como iones de sales inorgánicas (como el NaCl) cuando ambos existen en un proceso de cromatografía al mismo tiempo, intercambio competitivo y adsorción. ocurrirá. Cuando la concentración de Cl es grande, la proteína no se absorbe fácilmente y es fácil de eluir después de la adsorción. Cuando la concentración de Cl es pequeña, la proteína es fácil de adsorber y no es fácil de eluir después de la adsorción. adsorción. Por lo tanto, en la cromatografía de intercambio iónico, generalmente se utilizan dos métodos para separar proteínas. Uno es aumentar la fuerza iónica del eluyente y el otro es cambiar el valor del pH del eluyente. Cuando aumenta el valor del pH, se inhibe la cationización de la proteína y se debilita la fuerza de adsorción al intercambiador de cationes. Cuando el valor del pH disminuye, se inhibe la anionización de la proteína, reduciendo así la adsorción de la proteína al intercambiador aniónico. Cuando se utiliza un intercambiador aniónico, el aumento de iones de sal reduce el valor del pH. Cuando se utiliza un intercambiador de cationes, aumentar la concentración de iones de sal aumentará el pH de la solución.