¿Principio de purificación de proteínas con etiquetas de bandera?
La etiqueta FLAG es una secuencia peptídica artificial utilizada para la purificación y detección de proteínas. A menudo se introduce en la proteína objetivo para investigaciones posteriores. La secuencia de la etiqueta FLAG es DYKDDDDK (o DYKDDDDKDYKDDDDK), donde D representa ácido aspártico, Y representa tirosina y K representa lisina.
El principio de purificación de la proteína de la etiqueta FLAG generalmente se basa en la tecnología de cromatografía de inmunoafinidad. Los pasos específicos son los siguientes:
Expresión: conecta la secuencia de ADN de la proteína objetivo a la etiqueta FLAG. y pasarlo a través de los sistemas de expresión apropiados (como bacterias, células de mamíferos, etc.).
Lisis celular: recolecte las células que se expresan y utilice métodos de lisis celular apropiados (como ultrasonido, alta presión, etc.) para destruir la membrana celular y liberar la proteína objetivo.
Cromatografía de afinidad: Cargue el lisado celular en una columna que contenga una resina de afinidad con una etiqueta anti-FLAG específica (como la resina de afinidad Anti-FLAG M2). Se forma una unión específica entre la etiqueta FLAG y el anticuerpo, y la proteína objetivo se une a la resina de afinidad.
Elución: cambie la unión entre la proteína objetivo y la resina de afinidad mediante un tampón de elución (como una solución salina de alta concentración, condiciones de pH bajo, etc.), de modo que la proteína objetivo pueda eluir del resina.
Purificación: recoja la proteína objetivo en la solución de elución y purifíquela mediante métodos adecuados (como precipitación, concentración, etc.) para obtener proteína etiquetada con FLAG purificada.
Identificación: Identificar y analizar la proteína purificada mediante medición de la concentración de proteínas, electroforesis en gel SDS-PAGE, Western blot y otras técnicas.
Las condiciones y pasos específicos para purificar proteínas marcadas con FLAG pueden variar según el diseño experimental y las características de la proteína diana. Al purificar proteínas marcadas con FLAG, también se debe prestar atención a seleccionar la resina de afinidad y las condiciones de elución adecuadas, así como a realizar la verificación y detección adecuadas de la proteína purificada.