¿Determinación del contenido de proteínas mediante el método Bradford?

El método Bradford se utiliza para medir el contenido de proteínas, que es el método Coomassie Brilliant Blue. El principio es que Coomassie Brilliant Blue es marrón rojizo en estado libre y tiene una absorción de luz máxima a 488 nm; Se vuelve azul cuando se combina con proteína, el conjugado proteína-pigmento tiene una absorción máxima de luz en la longitud de onda de 595 nm. Su valor de absorción de luz es proporcional al contenido de proteínas, por lo que puede usarse para la determinación cuantitativa de proteínas.

La combinación de proteína y Coomassie Brilliant Blue alcanza el equilibrio en aproximadamente 2 minutos y la reacción se completa muy rápidamente; la combinación permanece estable en 1 hora a temperatura ambiente. Los reactivos de este método son simples de preparar, fáciles y rápidos de operar, y la reacción es muy sensible. La sensibilidad es 4 veces mayor que la del método Lowry y puede determinar el contenido de proteína a nivel de microgramos. Las principales desventajas son la estructura de la proteína especial y la presencia de reactivos que interfieren en los componentes del tampón.

Información ampliada:

El método del azul brillante de Coomassie es relativamente preciso para la cuantificación de la mayoría de proteínas, pero no es adecuado para la cuantificación de polipéptidos básicos de moléculas pequeñas. Como la ribonucleasa o la lisozima. La concentración de detergente superior a 0,2 afectará los resultados de la medición. Como TritonX-100, SDS, NP-40, etc.

Debido a los diferentes contenidos de arginina y aminoácidos aromáticos en varias proteínas, el método de tinción con azul brillante de Coomassie tiene una gran desviación cuando se utiliza para la determinación de diferentes proteínas. -Las globulinas son proteínas estándar para reducir las desviaciones en esta zona.

Enciclopedia Baidu-Método del azul brillante de Coomassie