Principio del etiquetado fluorescente fitc
El principio del etiquetado fluorescente de fitc es el siguiente:
El isotiocianato de fluoresceína FITC es un método comúnmente utilizado para marcar anticuerpos. FITC es generalmente amarillo. Polvo o cristales de color marrón o tostado que pueden almacenarse a bajas temperaturas durante varios años. En condiciones alcalinas, el enlace amida de carbono de FITC se puede combinar con el grupo amino lisina en la proteína del anticuerpo para formar un conjugado de proteína FITC, es decir, un anticuerpo fluorescente o un conjugado fluorescente.
Las moléculas de anticuerpos pueden marcar de 15 a 20 moléculas de FITC. El anticuerpo marcado aún puede mantener la capacidad de unirse al antígeno correspondiente y producir fluorescencia de color amarillo verdoso bajo la estimulación de luz ultravioleta o azul violeta de una fuente fluorescente. Puede observarse a través de un microscopio de fluorescencia o analizarse utilizando un citómetro de flujo. caracterizar, localizar o cuantificar el antígeno.
Métodos de etiquetado de anticuerpos FITC
El etiquetado de anticuerpos FITC incluye principalmente el método de etiquetado directo de Marshall, el método de etiquetado indirecto de Chadwick, el método de etiquetado mejorado y el método de diálisis.
Notas sobre el etiquetado de anticuerpos FITC
1. La temperatura, el tiempo, el pH, la fluoresceína y la calidad de las proteínas son factores que afectan la eficiencia del etiquetado y deben controlarse.
2. Durante el funcionamiento de la fluoresceína y sus anticuerpos marcados, se debe tener cuidado de evitar la luz y la velocidad de agitación debe ser la adecuada para evitar la generación de burbujas.
3. Preste atención al correcto funcionamiento para garantizar que el cilindro sea uniforme y que la superficie del cilindro sea plana sin burbujas ni grietas.
4. La carga y elución de la muestra se debe realizar antes y después del corte. El corte frontal significa agregar la muestra cuando el tampón superior de la columna es tangente al plano del gel, y el corte posterior significa agregar el tampón de elución cuando la muestra es tangente al plano del gel.