Introducción al 5-HT

Contenido 1 Descripción general 2 Alias ​​de 5HT 3 Examen médico de serotonina 3.1 Nombre del examen 3.2 Clasificación 3.3 Principio de determinación de serotonina 3.4 Reactivos 3.5 Método de operación 3.6 Valor normal 3.7 Importancia clínica de los resultados de la prueba 3.8 Nota 3.9 Enfermedades relacionadas es una entrada de redireccionamiento que comparte contenido de serotonina. Para facilitar la lectura, la serotonina en el siguiente texto ha sido reemplazada automáticamente por 5HT. Puede hacer clic aquí para restaurar la apariencia original o utilizar el método de notas para mostrar 1 descripción general

Serotonina, también conocida como serotonina. , se deriva del triptófano, el triptófano forma 5-hidroxitriptófano mediante la acción de la triptófano hidroxilasa y luego se convierte en 5-hidroxitriptamina mediante la descarboxilasa. La serotonina es un transmisor en el sistema nervioso central y su parte activa es la indolamina. Se encuentra ampliamente en el cerebro, las plaquetas, el estómago y otros tejidos, con su mayor contenido en el cerebro. Es una potente hormona del músculo liso y vasoconstrictora. Tiene un alto contenido en plaquetas y participa en la vasoconstricción y otros beneficios luego de que las plaquetas se rompen y liberan. 2/3 de la 5-hidroxitriptamina se excreta en el hígado después de combinarse con ácido sulfúrico o ácido glucurónico, o descomponer el indol. Aproximadamente 1/3 se oxida y desamina mediante la monoamonio oxidasa para formar 5HLAA y luego se excreta en la orina. 5HIAA es el producto final del metabolismo del 5-hidroxitriptófano y no tiene actividad biológica. 2 Alias ​​de 5HT

Serotonina; Serotonina 3 Examen médico de 5HT 3.1 Nombre del examen

5HT 3.2 Clasificación

Determinación de hormonas gt; Medición de 5HT

Dado que el número de receptores en una determinada cantidad de tejido es limitado, la reacción de unión entre el receptor y el ligando es saturable. Si se incuban ligandos radiactivos de diferentes concentraciones con preparaciones de membranas receptoras, cuando la reacción alcanza el equilibrio, se miden las cantidades de ligando unido y ligando libre, siendo el primero la cantidad total de unión radiactiva. Al mismo tiempo, se añadió ligando sin marcar del mismo tipo a cada tubo correspondiente en otro conjunto para determinar la cantidad de unión no específica. La diferencia entre el importe consolidado total y el importe consolidado no específico es el importe consolidado específico. La cantidad de unión específica al receptor indica la capacidad de unión limitada de la preparación de membrana del receptor. Cuando el radioligando (3H5-hidroxitriptamina) alcanza una determinada concentración, el valor de unión más alto tiende a ser constante. Es decir, la cantidad de unión del receptor y el ligando comienza a aumentar a medida que aumenta la concentración del ligando radiactivo. Cuando el ligando radiactivo alcanza una determinada concentración, la unión del receptor y el ligando alcanza la saturación. determina 5HT (5-hidroxitriptamina). La capacidad de unión (RT) de los ligandos de los receptores y de los receptores cerebrales y la capacidad de los receptores para unirse a los ligandos se expresan mediante la constante de disociación de equilibrio Kd. Sus fórmulas de reacción son las siguientes:

En la fórmula, R: receptor,

L: ligando

V1: complejo; tasa de formación de RL;

V2: tasa de disociación del complejo;

K1 y K2: constantes de velocidad correspondientes, según la ley de acción de masas.

Si [] representa concentración, entonces

V1＝K1[R][L]

V2＝K2[RL]

Cuando la reacción alcanza el equilibrio, V1 = V2, es decir, K1 [R] [L] = K2 [RL]. Si Kd representa K2/K1, la unidad de Kd es la unidad de concentración (mol/L). Kd, la afinidad. 3.4 Reactivos

(1) Instrumentos: contador de centelleo de líquidos, ultracentrífuga, centrífuga refrigerada de baja velocidad, homogeneizador de dispersión de alta velocidad, triturador ultrasónico, agitador magnético, baño de agua a temperatura constante (37°C), micro- Inyector de muestra de volumen, papel de filtro de fibra de vidrio tipo 69 o papel de filtro de fibra de vidrio GF/B Waterman, colector de células de cabezales múltiples e instrumentos quirúrgicos.

(2) Reactivos químicos: Tris, AR, ácido clorhídrico, AR, ácido ascórbico, AR, pargilina AR, 3H5HT, 6×1012Bq/mmol, concentración 3,7×107Bq/ml, pureza radioquímica >97, PPO, POPOP, xileno, AR, sulfato de creatinina 5HT.

(3) Preparación de la solución

①50 mmol/L TrisHCl pH7,7.

② Solución de TrisHCl a 50 mmol/L, que contiene 0,1 de ácido ascórbico y 10 μmol de eugenina, ajusta el pH a 7,2.

③Solución 5HT de 10μmol/L, use la solución ② para disolver el sulfato de creatinina 5HT a una concentración de 10μmol, guárdela en un lugar oscuro para su uso posterior, ya que se oxida fácilmente con la luz solar, así que prepárela para su uso inmediato. usar.

④ Preparación del ligando radiactivo: Este experimento utiliza 3H5HT como ligando radiactivo del receptor 5HT. La actividad específica es 6×1012Bq/mmol/L y la concentración es 3,7×107Bq/ml. Esto es 3H5HT599Bq/pmol, o 3,7×104Bq/1μl. La concentración química de 3H5HT que se requiere para preparar es 242 pmol/ml. De acuerdo con los requisitos anteriores, use un microinyector para extraer con precisión 3,92 μl de 3H5HT en un vial, séquelo con nitrógeno, agregue 1 ml de solución ②, agite bien y dejar de lado. Tome 20,66 μl y colóquelos en el papel de filtro, séquelo a 80 °C durante 1 hora, colóquelo en una copa de centelleo, agregue 4 ml de líquido de centelleo para medir la radiactividad, asumiendo que la eficiencia de medición del instrumento es 44, luego el recuento medido debe ser 79121 cpm/5 pmol3H5 de hidroxitriptamina. Reservar en un baño de hielo.

Líquido de centelleo de xileno ⑤0.4PPO, 0.02POPOP. 3.5 Método de operación

(1) Preparación de los receptores de membrana:

①Homogeneizado de cerebro: decapitar la rata o el ratón y sangrar, cortar la cabeza y colocarla en un baño de hielo, y usar hueso Cortar el cráneo e inmediatamente sacar el cerebro, retirar la cápsula y la sangre residual, cortarlo en pedazos y agregar 20 veces el peso de la solución preenfriada ①, homogeneizar con un dispersor endotipo de alta velocidad a 10000r/ min durante 1 minuto, y luego triturarlo con ondas ultrasónicas Homogeneizar durante 60 segundos. Todo el proceso se realizó en un baño de hielo.

② Centrífuga: Centrifugue el homogeneizado de cerebro a 1000 × g durante 10 minutos para eliminar los núcleos y los materiales densos. Utilice un gotero para transferir con cuidado el sobrenadante a otro tubo de centrífuga y luego centrifugue a 50000 × g durante. 10 minutos, desechar el sobrenadante, lavar el precipitado con la solución ① y centrifugarlo dos veces. El precipitado final son fragmentos de membrana celular que contienen receptores. Todas las operaciones se realizan entre 0 y 4°C.

③ Suspensión: El precipitado se suspende en la solución ②, y luego se homogeneiza con un molinillo ultrasónico durante 60 segundos. Luego use la solución ② para preparar una suspensión que contenga 11,76 mg de peso húmedo de tejido cerebral por mililitro de suspensión. Tomar 0,2 ml y medir su contenido en proteínas según el método Lowry. Reservar en un baño de hielo.

(2) Reacción de unión El volumen total de la reacción es de 2 ml. El tubo de ensayo se divide en dos partes, una parte es el tubo de reacción de unión total y la otra parte es la reacción de unión no específica. tubo.

①Prueba de unión total: Añadir los reactivos uno a uno en el orden de la Tabla 1.

②Prueba de unión no específica (NSB): en este experimento, el ligando de unión inhibido por 10-5 mol/L de 5-hidroxitriptamina se considera una unión no específica. Utilice la solución ② para preparar una solución de 5-hidroxitriptamina de 200 nmol/L para su uso posterior. Agregue los reactivos uno por uno en el orden indicado en la Tabla 2.

③Incubación: Después de agregar el último receptor de membrana reactivo, mezclarlo inmediatamente en el mezclador, luego colocar el tubo en un baño de agua a temperatura constante e incubarlo a 37°C durante 10 minutos, agitando continuamente, para que la reacción de unión alcanza el equilibrio.

④ Después de la separación del ligando unido y el ligando libre, coloque inmediatamente el tubo de reacción en un baño de hielo para terminar la reacción.

A. Utilice dos capas de papel de filtro de fibra de vidrio tipo 69 o papel de filtro de fibra de vidrio GF/B, utilice un colector de células de cabezales múltiples para realizar la filtración de descompresión y utilice una solución fría ① para eliminar los ligandos radiactivos libres que no están unidos a el receptor. Puede bombearlo todo de una vez. Filtre 10 tubos y lave cada tubo 3 veces con 5 ml de solución ①. El tiempo de separación debe completarse en 20 segundos. Una vez completada la separación, colocar el papel de filtro en un plato y secarlo en una estufa a 80°C durante 1 hora. B. Si no hay un recolector de celdas de cabezales múltiples, se pueden usar botellas de vidrio de presión negativa para filtrar los tubos uno por uno. No se pueden hacer demasiados tubos a la vez porque el tiempo de separación es extremadamente corto. Después de terminar un lote, haga un segundo lote.

⑤Medición: Coloque las membranas de filtro secas en la copa de centelleo en orden, agregue 4 ml de líquido de centelleo y mida la radioactividad con un contador de centelleo líquido. El recuento resultante es la cantidad total de ligando unido.

(3) Cálculo del resultado: el volumen de reacción es de 2 ml, que contiene 20 mg de tejido cerebral de peso húmedo. La eficiencia del papel de filtro medida por el contador de centelleo líquido en este laboratorio es 44. El propósito del procesamiento de datos es calcular la cantidad total de unión (RT) de receptores y radioligandos y sus constantes Kd. Los métodos más utilizados incluyen el método de Scatchard y el método del coeficiente de Hill.

Método de trazado de Scatchard:

A. La cantidad de 3H5 hidroxitriptamina agregada a cada tubo del tubo combinado total y el número de cpm medido (varios tubos). Generalmente, la cantidad total de 3H5 hidroxitriptamina agregada que está unida por el receptor es menor que 3, es decir, la cantidad total de 3H5 hidroxitriptamina agregada (LT) >> cantidad de unión de 3H5HT (B), porque F = LT-B, entonces F≈LT.

B. Calcule la cantidad de unión no específica (NSB): para reducir el impacto del error NSB en la unión específica, primero realizamos una regresión lineal en los datos experimentales y luego calculamos la unión total correspondiente. cantidad para cada uno según la ecuación El valor esperado NSB del tubo. Este procesamiento puede reducir significativamente el impacto de las fluctuaciones de los datos del NSB en los resultados experimentales.

C. Calcular la unión específica (B):

B = unión total (cpm) - NSB (cpm)

D. Calcular la cantidad de ligando libre (F): Sumar la cantidad total de 3H5HT (LT) >> cantidad de unión a serotonina 3H5 (B),

∵F＝LT－B ∴F≈LT.

E. Encuentre B/F:

Los cálculos anteriores se resumen en la Tabla 3.

Dibuja un diagrama de Scatehard con B/F como eje vertical y B (pmol) como abscisa.

En la calculadora, ingrese el valor B (pmol/g) en la tabla anterior en -0,99, Kd=8,72 nmol/L, BT=25,4 pmol/g de tejido (cerebro).

Gráfico de Hill: Los datos del diagrama de Hill se enumeran en la Tabla 4.

La primera y segunda columnas de la Tabla 4 son la cantidad añadida de 3H5 hidroxitriptamina y su logaritmo. La tercera columna está tomada de los datos del mapeo de Scatehard, Bmax = 25,4 pmol/g de tejido. Las columnas cuarta y quinta son la tasa de unión y su logaritmo. Con base en estos datos, se dibuja un diagrama de Hill con log[3H5 hidroxitriptamina] como eje X e Y. La pendiente de la regresión lineal = 0,94 y el coeficiente de Hill hH = 1,0. kd=9,3 nmol/l. Esto no es significativamente diferente del kd=8,73 obtenido mediante el análisis de Scatehard. 3.6 Valor normal

Suero 0,22~2,06 μmol/L (39~361 ​​ng/ml) 3.7 Importancia clínica de los resultados de laboratorio

(1) Aumento: síndrome de tumor carcinoide, síndrome de dumping postoperatorio, migraña, hipoxia, etc.

(2) Reducir: lupus eritematoso sistémico (LES), artritis reumatoide (artritis reumatoide), enfermedad mixta del tejido conectivo y otras enfermedades del tejido conectivo, enfermedad de Parkinson (parálisis temblores), corea, degeneración hepatolenticular (enfermedad de Wilson). ), esquizofrenia, neurastenia, etc. 3.8 Notas

También puede subir tras comer una gran cantidad de nueces y plátanos.

3.9 Enfermedades relacionadas